卧牛的组织培养与快速繁殖
　夏 时 云1，汪 远2，孙 涛3*（1.天津农业科学院生物技术中心，天津300192，2.北京景山学校，北京100006，3.天津医科大学基础医学院，天津300070）

　　Tissue Culture and Rapid Propagation of Gasteria armstrongii

　　XIA Shi-Yun1, WANG Yuan2 ，SUN Tao3* (The Center of Biotechnology, Tianjin Academy of Agricultural Sciences, Tianjin300192; Beijing Jingshan School , Beijing 100006; College of Preclinical Medicine ,Tianjin Medical University ,Tianjin 300070 )

　　1植物名称 卧牛（Gasteria armstrongii）

　　2材料类别 侧芽。供试植株来源于日本

　　カクタヌ专门家联盟。

　　3培养条件 （1）启动培养基：M S + 6-BA 2.0 mg•L-1 (单位下同)+ NAA 0.2 ；（2）分化培养基：M S + 6-BA 2.0 + KT 1.0 + PVP 2g•L-1 ；（3）增殖培养基： M S + 6-BA 1.0 + KT 0.5 + PVP 1 g•L-1 ；（4）复壮与生根培养基：1/2M S + NAA 0.2 。 以上培养基均加入3%蔗糖,0.7%琼脂，pH6.0。培养的温度为（25±2）℃，光照8 h•d-1,光照度为2 000 lx。

　　4生长与分化情况

　　4.1无菌材料的获得 除去侧芽外周叶片，保留生长点附近2~3片嫩叶。经流水冲洗10 min，1%新洁尔灭浸洗5min，无菌水冲洗3次，0.1%HgCl2溶液8 min，无菌水再冲洗6次。将消毒的材料置于无菌滤纸上，吸取残留液体，切去叶片尖端，将侧芽纵切分开，即成外植体。

　　4.2启动培养 将卧牛的外植体接入启动培养基（1），20d后依次从生长点、茎截面及叶截面等处陆续产生黄绿色愈伤组织，并伴有褐变现象，此时需将材料转入新鲜培养基中，否则愈伤组织会出现衰退。转移后的愈伤组织生长迅速，再经过30d左右生长点愈伤组织最先形成绿色球状小体 (GCB)，大约40~60d后叶截面和茎截面愈伤组织才开始形成GCB。

　　4.3分化培养 切取绿色的GCB团块转入分化培养基（2）中，约30 d后GCB开始向芽分化，从表面可以很直观地看到每个球状体都可以形成一个芽点，且绿色加深。继续培养20d，愈伤组织团块顶部的GCB首先形成芽，继而整个团块形成丛生芽，底部GCB分化较差，仍然保持GCB状态。分化形成的芽可以在5d内伸展出第一对叶片。

　　4.4芽的增殖 将上述丛生芽分割成4~5丛，每丛含有5~8个芽，并弃去底部未分化组织后转入增殖培养基(3)。经过7d左右的静止期，增殖开始并加速，大约30 d后各瓶都可以形成整瓶丛生芽。继代3代之后或者继代间隔过长，极易发生褐变，PVP的使用可以适当减缓褐变加重，但不能避免，故转瓶周期应控制在25d以内，同时切去基部的愈伤组织也可以减轻褐变。增殖倍数为4~6倍。

　　4.5壮苗与生根 将（3）中的丛生芽分割个单个芽，转入（4）中，每瓶6~8个。加强光照至3000lx或者采用散射阳光代替日光灯。大约10d，即可见50%左右的芽开始生根，20d后80%的芽生根，根短粗，2~3条。30d后芽的叶片增厚，第3~4片叶生出，根系变化不明显，有轻微褐变现象。

　　4.6移栽 采用蛭石：珍珠岩：泥炭=2：1：1的混合基质，经高压灭菌后装入苗钵，距顶端大约5 cm。打开瓶口炼苗2~3 d，依照孙涛论文范文http://www.chuibin.com/ 等的“多肉植物干处理出瓶法” [1]进行出瓶：取出植株，仅保留1~2条粗根，去掉其余根系，遮荫风干2~3d，扦插于基质中，用青霉素（80万u•L-1）、链霉素（0.5 g•L-1）、甲硝唑（0.1 g•L-1）、制霉菌素（100u•L-1）配成的“四抗”溶液浇灌，逐渐见光。采用“四抗”和日光辅助照射的瓶苗成活率可达90%以上。

　　5 意义与进展

　　卧牛是百合科脂麻掌属的多肉植物，原产于非洲开普省。此种植物是叶多肉的多肉植物之一和百合科多肉植物的代表种之一，各国植物园和园艺单位对其作了广泛收集和研究。卧牛主要通过播种、侧芽或叶插繁殖，繁殖系数很低，生长十分缓慢，不利于园艺品种的筛选和保存。组织培养技术可能是解决此问题的有效手段之一。国内曾有园艺种“白云卧牛”组织培养的报道，但本文所用的方法与之有明显区别。本文中的卧牛快速繁殖技术正在逐步应用于园艺生产。

　　参考文献

　　1.孙涛，金蕊，李德森等. 康平寿的组织培养与快速繁殖 .植物生理学通讯，2003，39（3）：233

　　2.孙涛，李德森.　截形十二卷的组织培养与快速繁殖. 植物生理学通讯，2002，38（6）：586