摘 要：在中枢神经系统中，少突胶质细胞是一种成髓鞘的神经胶质细胞，包裹神经元的轴突形成髓鞘。髓鞘缺失或脱髓鞘会导致一系列的神经系统病变。在本论文中，我们用原位杂交实验探究了Cmtm5基因在少突胶质细胞发育中的时空表达模式，Cmtm5是从E18.5天在野生型小鼠脊髓的成熟少突胶质细胞中开始表达的，之后渐渐增多，直到P15铺满整个脊髓。并且用Cmtm5和Olig2做共标记免疫组化实验进行了进一步的验证，证明了Cmtm5在野生型小鼠脊髓胶质细胞中仅在成熟的少突胶质细胞中表达。
Abstract：The Oligodendrocyte is one kind of glial cells that wrap axon and form myelin sheath. Absent of myelin and demyelination could lead to a series of diseases in the CNS. In this paper, we used in situ hybridization experiments to explore the spatial and temporal expression pattern of Cmtm5 gene in Oligodendrocyte development. Cmtm5 expressed began in mature Oligodendrocytes in the wild-type mouse spinal cord from E18.5 days. The expression was gradually increased until P15 covered the entire spinal cord. The Cmtm5 and Olig2 co-labeled immunohistochemistry experiments were further validated, demonstrating that Cmtm5 is only expressed in mature Oligodendrocytes in wild-type mouse spinal glial cells.
关键词：脊髓；少突胶质细胞；Cmtm5
Keyword: Spinal cord；Oligodendrocyte；Cmtm5
目录
1.引言 5
1.1 中枢神经系统 5
1.2 少突胶质细胞的作用 6
1.3 少突胶质细胞的发育 7
1.4 参与少突胶质细胞定向分化的转录调控 7
1.5 Cmtm5 8
2.实验内容设计 8
2.1实验目的及意义 8
2.2实验内容 9
2.3实验技术路线 9
3.实验材料与方法 10
3.1实验材料与试剂配方 10
3.1.1原位杂交试剂配方 10
3.1.2 ISH用探针制备相关试剂 11
3.1.3分子生物学实验试剂 11
3.2试验方法 12
3.2.1感受态细胞制备与连接产物转化 12
3.2.2 总RNA提取与cDNA的获得 12
3.2.3 基因克隆与载体构建 13
3.2.4 原位杂交探针的制备 14
3.2.5 小鼠材料的准备 16
3.2.6原位杂交 16
3.2.7免疫组化试验方法 18
4.实验结果 19
4.1 Cmtm5在不同时期小鼠脊髓中的表达模式 19
4.2 Cmtm5和Olig2双标记原位杂交和免疫组化实验结果 20
5.总结和讨论 21
5.1实验总结 21
5.2讨论 22
致 谢 22
1.引言
1.1 中枢神经系统
在脊椎动物中，神经系统是主要的功能调节系统。神经系统在脊椎动物的机体运动、生理活动甚至思维活动等多个方面有调控作用。中枢神经系统(central nervous system，CNS)和外周神经系统组成了脊椎动物的神经系统。中枢神经系统包括脊髓和大脑。脊髓通过与之相连的31对脊神经联系躯干、四肢和部分内脏器官，以及反射活动的方式管理这些器官的活动[1]。在脊椎动物中中枢神经系统的主要成分为神经元（Neurons）和各种胶质细胞（Glial cells）。神经元的主要功能是能接受刺激产生神经冲动并且进行传导。根据中枢神经系统中胶质细胞的大小和形状不同，可以将神经胶质细胞可以分为星形胶质细胞（Astrocytes）、少突胶质细胞（Oligodendrocyte，OLs）和小胶质细胞（microglial cells）。少突胶质细胞可以形成髓鞘，加快电信号准确地沿着神经元轴突传导[2]。星形胶质细胞是中枢神经系统胶质细胞中最大并且功能最多的细胞，而小胶质细胞因形态上比较小而得名，它相当于中枢神经系统中的吞噬细胞[3]。 Cmtm5在少突胶质细胞发育中的时空表达模式研究:http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_205496.html