雌激素（主要是雌二醇）直接支配雌性动物的生殖及其与此有关的一系列的生理机能变化。它在生殖过程中发挥着极其重要的生理作用，是雌性动物生殖系统发育和生殖的重要因子[10]。硫酸化反应是雌激素代谢的主要途径，而雌激素硫酸转移酶是该反应的关键酶。综上，本实验拟在对SULT1C3基因进行多态性检测的基础上，分析基因多态性与母猪雌激素水平的相关性，筛选出与苏淮猪雌激素水平显著相关的多态位点，为改善苏淮猪繁殖性能奠定基础，为苏淮猪的分子选育提供一定的理论支持。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验动物

试验动物来自江苏省淮安市淮阴种猪场，样本总数为42头，来自苏淮猪核心群母猪。

1.1.2样品的采集

每天7:00、15:00分别对苏淮母猪查情2次。一旦母猪出现外阴红肿、静立反射等发情现象时，采用前腔静脉采血的方法采集母猪发情期的血液，采血5mL，3000rpm离心10min，抽取2mL血清于-20℃冰箱保存。随后采集该母猪的耳样组织。采样前先

对猪只耳朵的待采部位用75%的酒精消毒，然后以剪耳钳剪取适量耳组织样，置于装

有75%酒精的2mL离心管中使酒精没过样品，置于-20℃冰箱存放。

1.1.3主要试剂、溶液

10%十二烷基硫酸钠SDS，1MTris•Cl，0.5MEDTA-Na，1MNaCl，蛋白酶K，Tris-饱和酚，氯仿，异戊醇，70%乙醇，去离子水，2×TaqPCRMix(Takara)，DL2000、DL5000DNAMarker(Takara)，EDTA•2H2O，Tris，硼酸，DNAGreen核酸染料，琼脂糖等。

1.2试验方法

1.2.1雌激素和孕激素的测定

（1）操作程序

取园底聚苯乙烯试管若干，编号后按以下加样顺序表进行加样。加样前所有试剂包括待测样品要摇匀。为了加样准确各种试剂和样品最好平衡到室温之后加样。

表1加样程序表

管别试剂 总T管 NSB管 S0管 S1~6管 样品或质控管

纯化水 — 100 — — —

“0”标准品 — 100 100 — —

S1~6标准品 — — — 100 —

样品或质控血清 — — — — 100

125I-E2 100 100 100 100 100

兔抗-E2抗体 100 100 100

充分混匀置37℃水浴1.5小时。

分离试剂 — 500 500 500 500

充分摇匀，3600转/分离心20分钟，吸弃上清液。用γ-测量仪测定各管沉淀的放射性计数。 苏淮猪SULT1C3基因多态性的检测与发情期血浆中雌激素水平的测定(3):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_205221.html