2.2 实验方法

参照24h换水式毒性试验方法进行试验。

先进行预备试验,估算乙醇试验24h的最低全致死浓度(100%死亡)和96h最大全部存活浓度范围,确定正式试验的浓度区间。然后在该范围内设4各浓度组,浓度的设定采用梯度间距法和1个对照组,每组设2个平行试验,取其平均值,其浓度梯度为12ml/L、16 ml/L、20 ml/L、24 ml/L。试验容器规格为58cm×37cm×35cm的水簇箱,水温11.5±0.3℃,pH值7.1±0.2。每个玻璃缸中给予不同体积的乙醇溶液,随机放入8尾虾,每24h换试验溶液1次。及时捞出死虾和废物。

试验开始后,前6h每隔1h连续观察,然后每隔3h观察记录试验虾的活动。连续观察12h,发现死亡个体及时捞出。克氏原螯虾的死亡以其身体完全僵硬不动,从药液中捞出 5min 后仍不动为标准。观察内容包括试验虾的行为异常、体色变化,记录克氏原螯虾的药物中毒症状、死亡症状等,记录12h、24h、36h、48h试验虾的死亡数和死亡率。

2.3 数据处理

根据乙醇对克氏原螯虾的急性毒性试验结果,利用Excel 2003进行整理和分析,根据克氏原螯虾的死亡数及死亡时间,分别计算12h、24h、36h、48h的半致死浓度,计算公式及具体计算步骤如下:

LC50=C1+[(P1-50%)/(P1-P2)]×(C2-C1)                              ①

式中:C1、C2分别为存活率接近 50%的低端浓度和高端浓度,P1、P2分别为相应的存活率[7]。

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