2 实验材料与方法

2.1 材料

主要材料：白桦，鹅耳枥，榛子，天目铁木种子。

主要仪器：离心机，离心管，水浴锅。

主要实验方法：

1.种子中主要内源营养物质含量的测定：用蒽酮比色法测定可溶性糖和淀粉含量，用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白含量，用索式提取法测定粗脂肪含量。

2.种子中代谢酶活性的测定：用3，5 -二硝基水杨酸比色法测定淀粉酶活性，用Folin-酚法测定蛋白酶活性，用碱式滴定法测定脂肪酶的活性。

2.2 部分内源营养物含量测定

2.2.1 可溶性糖含量和淀粉含量

（1）可溶性糖含量

样品提取：

称取样品0.01 g，加80%酒精研磨，再用80%酒精冲洗研钵，共5 mL，80%水浴30 min后用冰水浴冷却，然后4000 r/min离心10分钟，取上清液。在往剩余残渣中加入5 min 80%酒精，反复上述步骤，取上清液。最后把两次的上清液合并。

测定：

将1 mL的上清液，倒在5 mL蒽酮试剂（0.2 g蒽酮溶于100 mL 80% H2SO4）上，并沸水浴10分钟，期间摇晃几次，结束后用冰水浴冷却，再620 nm下测定吸光值。

（2）可溶性淀粉含量

提取：

在可溶性糖的剩余残渣中加入4 mL蒸馏水，在沸水浴15 min。加入9.2 mol/L高氯酸0.4 mL。静置在沸水浴15 min。冷却后，然后冷却，并加入5.6 ml水，10000 r/min离心10 min，收集上清液。

测定：

在1 mL上清液中加入5 mL蒽酮试剂，然后沸水浴中10 min，中间摇晃几次，结束后用冰水浴冷却，最后在620nm下测定吸光值。